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加葡萄糖(处理③)。在基础配方中添加牛肉膏和蛋白胨后,虫草生长与只添加无机盐相比没有明显差别,推测牛肉膏和蛋白胨提供的主要营养物质———磷酸盐、碳源、氮源和维生素在磷酸二氢钾和硫酸镁存在的情况下已并非限制性因子,即达到了营养饱和。因此再添加并不能有促进生长作用,反而由于添加物质过多导致培养基缝隙过密,不利于出草。处理⑤和处理⑥的无机盐和葡萄糖添加量相等,但分别添加了牛肉膏和蛋白胨,虫草生长出现统计学差异,这可能是由于牛肉膏和蛋白胨分别添加导致培养基中C:N比例改变,牛肉膏中提供大量碳源,而蛋白胨提供大量氮源,而只有在合适的C:N前提下,虫草子实体才能正常生长[7]。在葡糖糖提供了足够碳源的基础上,培养基中添加蛋白胨更适合虫草生长。在大米培养基中只添加有机质(处理②),虫草的生长和只添加无机盐相当,因此,在实际生产中,性质稳定而价格较低的无机盐更为实用。
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用750g、口径4cm的瓶,也可采用广口瓶或罐头瓶。拌料装瓶主料与辅料等先拌匀,把糖溶于水中而后逐渐加入料中并充分拌匀,每100kg干料加水140?160kg,以手紧握料指缝中有少量水滴下为宜。采用徒手或装瓶机分装,要求松紧适中,直至离瓶口1cm处,压平,中央用捣木打孔至瓶底,洗净瓶口、瓶壁污物,瓶口用牛皮纸包好。灭菌接种常压100兀灭菌,持续8?12h,高压灭菌121兀,保持1.5h。待冷却后,在无菌条件下接入菌种。然后放到培养室,控制温度25兀,室内相对湿度控制在70%以下。培养室内保持黑暗状态,以利菌丝生长。一般经20d发菌培养,当菌丝长至1/2瓶时,可以除去封口纸,搬至于实体发生室。此时控温25兀?28兀,相对湿度增至90%~95%,保持空气清新,增强漫射光。菌盖不断生长,直至四周白色生长圈消失,即停止生长扩大,但仍可继续加厚。子实体形成菌管,弹射出红褐色孢子。
酶解法.酶解法通过利用几丁质酶、纤维素酶或溶壁酶等酶液的一种或多种,使灵芝抱子细胞壁中的成分降解,释放其有效成分.使用生物酶辅助提取灵芝酸A,终实现灵芝酸A的提取率达到0.54%. 溶菌法.利用微生物和灵芝抱子一同发酵,让微生物在发酵过程中降解灵芝抱子细胞壁.利用益生菌枯草芽抱杆菌、嗜酸乳杆菌与灵芝抱子进行液态发酵,终使得灵芝抱子破壁率达到85%以上.化学法化学法的优点与生物法较为相似;缺点是提取溶剂易导致有效成分变性,且溶剂残留不易去除.溶剂提取法.溶剂提取法利用“相似相溶”原理,使灵芝抱子在水、乙醇等溶剂中长时间浸泡或回流,从而使有效成分扩散到溶剂中.例如,Lee等8采用25%乙醇提取灵芝中的成分,终减压浓缩并定容至500mL保存,通过灵芝的25%乙醇提取物,研究其通过Nrf2/HO-1通路增强细胞的抗氧化作用,该方法对灵芝孢子的提取率较好.
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